Pierwsza cerkiew prawosławna we Florencji powstała w 1818 w pałacu rodziny Buturlinów (Palazzo Niccolini). Świątynia ta służyła również innym Rosjanom zamieszkałym stale lub czasowo w mieście. Inna domowa cerkiew została zorganizowana przez rodzinę Demidow i przez Annę Nowicką (pod koniec XIX wieku). Równolegle rosyjskie Ministerstwo Spraw Zagranicznych podjęło działania na rzecz budowy wolnostojącej cerkwi, na wzór tych, które istniały już przy innych ambasadach Rosji. Prace budowlane rozpoczęły się w 1870. W celu większego zachęcenia wiernych do finansowego wspierania prac, kler rosyjski rozpoczął kampanię, w której głosił konieczność wzniesienia wspaniałej cerkwi prawosławnej w miejscu, gdzie została podpisana "haniebna" unia kościelna. Pieniądze na budowę wpłynęły także od ministerstwa.